Nitric oxide and immune response in infection control of Caseous Lymphadenitis / Óxido nítrico e resposta imune no controle de infecção da Linfadenite Caseosa

This study aimed to evaluate aspects of host immune response using an experimental infection model of Corynebacterium pseudotuberculosis (CP) in C57/Black6 wild-type and knockout for nitric oxide (KO-NO) mice. 28 mice were evaluated: 4 wild-type controls; 10 wild-type infected with CP; 4 KO-NO controls; 10 KO-NO infected with CP. Infection procedures were carried out by intraperitoneal inoculation using 107. Infected C57/Black6 KO-NO mice began to die after the 5° day post-inoculation, up until the 14º day. Neutrophils were found in increased numbers in the infiltrate of KO-NO murine peritoneal cavities. Examination of splenic tissue revealed an accumulation of lymphocytes, predominantly CD8 T-cells, in experimental animal groups. KO-NO animals were found to have a predominance of granulomas 7 days post-inoculation, primarily in the lymph nodes. In addition, greater amounts of bacteria were recovered from the mesenteric lymph nodes of KO-NO mice. There was no statistically significant difference in the levels of total IgG and its subclasses 14 days post-inoculation between KO-NO and wild groups. The results suggest the importance of nitric oxide in the process of controlling CP infection, as KO-NO animals were observed to be markedly more affected by infection with this bacterium.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar os aspectos da resposta imune do hospedeiro, mediante o uso de um modelo experimental de infecção de Corynebacterium pseudotuberculosis (CP) em camundongos C57/Black6 do tipo selvagem e em C57/Black6 knockout para o óxido nítrico (KO-NO). Foram avaliados 28 camundongos: quatro controles de tipo selvagem; 10 do tipo selvagem infectados com CP; quatro controles KO-NO; e 10 KO-NO infectados com CP. A infecção foi realizada via intraperitoneal, usando-se 107. Os animais C57/Black6 KO-NO infectados começaram a vir a óbito no quinto dia pós-inoculação, o que aconteceu até o 14º dia. Um número maior de neutrófilos foi encontrado na sua cavidade peritoneal. O exame do baço revelou um acúmulo de linfócitos, predominantemente células T CD8, nos grupos de animais experimentais. Nos animais KO-NO, foi observada a presença de granulomas, sete dias pós-inoculação, principalmente nos gânglios linfáticos. Além disso, uma maior quantidade de bactérias foi detectada dos linfonodos mesentéricos desses animais. Não houve diferença estatisticamente significante nos níveis séricos IgG total e em suas subclasses aos 14 dias pós-inoculação nos grupos KO-NO e selvagem. Os resultados obtidos sugerem a importância do óxido nítrico no processo de controle da infecção por CP.(AU)

Real-time PCR for detection of Brucella ovis and Histophilus somni in ovine urine and semen / PCR em tempo real para detecção de Brucella ovis e Histophilus somni em urina e sêmen ovino

A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.

Species-specific nested PCR as a diagnostic tool for Brucella ovis infection in rams / Nested PCR espécie-específica para o diagnóstico da infecção por Brucella ovis em carneiros

The aim of the present study was to evaluate a species-specific nested PCR based on a previously described species-specific PCR for detection of B. ovis in semen and urine samples of experimentally infected rams. The performance of the species-specific nested PCR was compared with the results of a genus-specific PCR. Fourteen rams were experimentally infected with the Brucella ovis REO 198 strain and samples of semen and urine were collected every week up to 180 days post infection. Out of 83 semen samples collected, 42 (50.6%) were positive for the species-specific nested PCR, and 23 (27.7%) were positive for the genus-specific PCR. Out of 75 urine samples, 49 (65.3%) were positive for the species-specific nested PCR, whereas 11 (14.6%) were genus-specific PCR positive. Species-specific nested PCR was significantly more sensitive (P<0.001) than the genus-specific PCR in semen and urine from experimentally infected rams. In conclusion, the species-specific nested PCR developed in this study may be used as a diagnostic tool for the detection of B. ovis in semen and urine samples from suspected rams.

O presente estudo objetivou avaliar uma técnica de nested PCR espécie-específica delineada a partir de PCR espécie-específica descrita anteriormente para detecção de B. ovis em sêmen e urina de carneiros infectados experimentalmente. O desempenho da nested PCR espécie-específica foi comparado com os resultados de uma PCR gênero-específica. Quatorze carneiros foram infectados experimentalmente com Brucella ovis REO 198 e amostras de sêmen e de urina foram colhidas semanalmente até 180 dias após a infecção. De 83 amostras de sêmen, 42 (50,6%) foram positivas pela nested PCR espécie-específica, e 23 (27,7%) foram positivas pela PCR gênero-específica. De 75 amostras de urina, 49 (65,3%) foram positivas pela nested PCR espécie-específica, enquanto 11 (14,6%) foram positivas em PCR gênero-específica. A técnica de nested PCR espécie-específica foi significativamente mais sensível (P<0,001) do que a PCR gênero-específica no sêmen e na urina de carneiros infectados experimentalmente. Em conclusão, a nested PCR espécie-específica desenvolvida neste estudo pode ser utilizada como ferramenta de diagnóstico para detecção de B. ovis em sêmen e urina de carneiros suspeitos.

Comparison of infection by brucella spp: in free-ranging and captive wild animals from São Paulo State, Brazil

The aim of the current study was to evaluate the infection rate by Brucella spp. in wild and in captive animals. Serum samples from 121 animals (94 free-ranging and 27 captive) of different mammal species were evaluated. Sera were submitted to rose Bengal test (RBT) for screening and serum agglutination tests (SAT) and 2-mercaptoethanol test (2-ME) for confirmatory results. Nine animals (five free-ranging and four captive) tested positive in RBT, but negative in the confirmatory tests. Several domestic animal diseases that have control programs are not focused on wild reservoirs, such as brucellosis in Brazil. The study of new reservoirs in wildlife is essential to prevent emerging diseases.

Contribution of conservation genetics in assessing neotropical freshwater fish biodiversity / Contribuição da Genética da Conservação para o conhecimento da biodiversidade dos peixes de água doce neotropicais

Human activities have a considerable impact on hydrographic systems and fish fauna. The present review on conservation genetics of neotropical freshwater fish reveals that DNA analyses have been promoting increased knowledge on the genetic structure of fish species and their response to environmental changes. This knowledge is fundamental to the management of wild fish populations and the establishment of Evolutionary Significant Units capable of conserving genetic integrity. While population structuring can occur even in long-distance migratory fish, isolated populations can show reduced genetic variation and be at greater risk of extinction. Phylogeography and phylogeny have been powerful tools in understanding the evolution of fish populations, species and communities in distinct neotropic environments. Captive fish can be used to introduce new individuals and genes into the wild and their benefits and disadvantages can be monitored through genetic analysis. Understanding how fish biodiversity in neotropical freshwaters is generated and maintained is highly important, as these habitats are transformed by human development and fish communities are increasingly exploited as food sources to sustain a growing human population.

Atividades humanas têm um grande impacto sobre os sistemas hidrográficos e a fauna de peixes. A presente revisão em genética da conservação dos peixes de água doce neotropicais revela que as análises de DNA têm promovido um crescimento no conhecimento da estrutura genética das espécies e suas respostas às alterações ambientais. Este conhecimento é fundamental para o manejo das populações de peixes nativos e para o estabelecimento de Unidades Evolutivas Significantes capazes de conservar a integridade genética dessas populações. Enquanto o fenômeno de estruturação de populações pode ocorrer mesmo em peixes migradores de longas distâncias, populações isoladas podem mostrar reduzida variação genética e apresentar grande risco de extinção. Em adição, a filogeografia e a filogenia têm dado importantes contribuições para o entendimento da evolução das populações, espécies e comunidades de peixes em distintos ambientes neotropicais. Populações de cativeiro podem ser utilizadas como fonte de introdução de novos indivíduos e genes no ambiente natural e seus benefícios e desvantagens podem ser monitorados por meio de análises genéticas. É altamente importante, portanto, entender como é gerada e mantida a biodiversidade de peixes de água doce neotropicais, uma vez que os habitats são transformados pelo desenvolvimento humano e as comunidades de peixes têm sido intensamente exploradas como alimento de sustentação desse crescimento das populações humanas.

Prevalence and clinical aspects of respiratory syncytial virus A and B groups in children seen at Hospital de Clínicas of Uberlândia, MG, Brazil

Respiratory syncytial virus (RSV) is well recognized as the most important pathogen causing acute respiratory disease in infants and young children, mainly in the form of bronchiolitis and pneumonia. Two major antigenic groups, A and B, have been identified; however, there is disagreement about the severity of the diseases caused by these two types. This study investigated a possible association between RSV groups and severity of disease. Reverse transcription-polymerase chain reaction was used to characterize 128 RSV nasopharyngeal specimens from children less than five years old experiencing acute respiratory disease. A total of 82 of 128 samples (64.1 percent) could be typed, and, of these, 78 percent were group A, and 22 percent were group B. Severity was measured by clinical evaluation associated with demographic factors: for RSV A-infected patients, 53.1 percent were hospitalized, whereas for RSV B patients, 27.8 percent were hospitalized (p = 0.07). Around 35.0 percent of the patients presented risk factors for severity (e.g., prematurity). For those without risk factors, the hospitalization occurred in 47.6 percent of patients infected with RSV A and in 18.2 percent infected with RSV B. There was a trend for RSV B infections to be milder than those of RSV A. Even though RSV A-infected patients, including cases without underlying condition and prematurity, were more likely to require hospitalization than those infected by RSV B, the disease severity could not to be attributed to the RSV groups.

Profile and regulation of annexin II expression during early embryogenesis in cattle / Perfil e regulação da expressão da anexina II durante a embriogênese em bovinos

The presence of annexin II (Ann-II) during the initial stages of bovine embryo development and the regulation of Ann-II expression by retinol and insulin-like growth factor I (IGF-I) were studied. Bovine embryos at different stages of development were produced in vitro on Synthetic Oviductal Fluid (SOF) medium (control group), SOF supplemented with retinol (retinol group; 0.1ng/ml), or IGF-I (IGF-I group; 10ng/ml). The embryos were processed for mRNA extraction, cDNA production and polymerase chain reaction (PCR) using Ann-II-specific oligonucleotides. Ann-II was detected in all stages of early embryo development, except for the 16-cell stage. The blastocyst rates were significantly higher (P<0.05) in the group supplemented with retinol (37.8 percent, 45/119) during in vitro embryo culture (IVC) than in those cultured in SOF (20.5 percent, 24/117) or SOF with IGF-I (25.8 percent, 24/93). Semiquantitative analysis of Ann-II expression in embryos produced in medium supplemented with IGF-I or retinol revealed a lower expression of this gene when compared with embryos cultured in SOF (P<0.05). The Ann-II expression was not different in embryos cultured in the presence of retinol and IGF-I. The presence of retinol increased the production of embryos in vitro by decreasing the expression of Ann-II in early-stage of bovine embryo

Foram estudadas a presença de anexina II (Ann-II) durante a fase inicial do desenvolvimento embrionário bovino e sua regulação pelo retinol e pelo fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I). Embriões bovinos em diferentes estádios de desenvolvimento foram produzidos in vitro em fluido sintético de oviduto (SOF) sem suplementação (grupo-controle) ou suplementado com retinol (grupo retinol; 0,1ng/ml medium) ou IGF-I (grupo IGF-I; 10 ng/ml de meio). Os embriões foram processados para extração de mRNA, produção de cDNA e posterior análise por reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para Ann-II. Em todos os estádios de desenvolvimento embrionário, Ann-II foi detectada, exceto no estádio de 16 células. Os índices de blastocisto foram significativamente maiores (P<0,05) no grupo suplementado com retinol (37,8 por cento, 45/119) durante o cultivo in vitro de embriões (PIV) que aqueles obtidos no grupo controle (20,5 por cento, 24/117) ou no IGF-I (25,8 por cento, 24/93). Análise semiquantitativa da expressão de Ann-II em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I ou retinol revelou uma menor expressão desse gene quando comparado com embriões cultivados somente em SOF (P<0,05). A expressão de Ann-II não foi diferente em embriões cultivados na presença de retinol e IGF-I. A presença de retinol aumentou a produção de embriões in vitro, e diminuiu a expressão de Ann-II em estádios iniciais do desenvolvimento embrionário bovino

O uso da Ignatia amara na ansiedade por separação felina: relato de caso / Use of Ignatia amara in the anxiety on account of feline separation: report of a case

Ansiedade por separação é um distúrbio comportamental em resposta ao estresse na ausência do proprietário, podendo estar relacionado à mudança ambiental, principalmente em felinos. Os sinais observados são defecação e micção em locais impróprios, comportamento destrutivo, vocalizações excessivas, anorexia, depressão ou hiperatividade. O diagnóstico baseia-se no histórico clínico e sintomatologia, sendo a terapêutica habitual caracterizada pelo uso de antidepressivos, ansiolíticos e mudanças no manejo. Entretanto, destaca-se a Homeopatia como possibilidade terapêutica, tendo indicação freqüente o medicamento Ignatia amara, por sua ação nas manifestações nervosas, depressão, angústias e tristezas. Visando apresentar a referida terapêutica, buscou-se relatar um caso de um felino demonstrando mudança comportamental com depressão, urinando e defecando em locais incomuns, o que se iniciou após mudança de cidade. Institui-se a terapêutica com o medicamento Ignatia amara 12 CH, observando-se uma evolução positiva já nos primeiros 15 dias, estendendo-se o protocolo até 60 dias, quando a paciente não apresentou mais sintomatologia, configurando-se assim a eficácia do medicamento homeopático.

Interação entre células do cumulus e atividade da proteína quinase C em diferentes fases da maturação nuclear de oócitos bovinos / Interaction between cumulus cells and the activity of protein kinase C at different stages of bovine oocyte nuclear maturation

Verificou-se a influência da proteína quinase C (PK-C) no reinício e na progressão da meiose em oócitos bovinos, determinando se as células do cumulus são mediadoras da PK-C na regulação da maturação dos oócitos. Complexos cumulus-oócitos (CCO) e oócitos desnudos (OD), distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos (T) com base na presença de um ativador da PK-C (PMA) (T1 e T2), de um forbol éster incapaz de ativar a PK-C (4alfa-PDD-controle) (T3 e T4) ou de apenas o meio básico (TCM-199-controle) (T5 e T6), foram cultivados por 7, 9, 12, 18 e 22 horas. A percentagem de rompimento da vesícula germinativa no grupo cultivado com PMA foi maior do que nos dois grupos controle, com e sem células do cumulus. O cultivo de CCO e OD por 12 e 18 horas demonstrou que a PK-C influencia a progressão para os estádios de metáfase I (MI) e metáfase II (MII) de maneira dependente das células do cumulus. Nos períodos de 9 e 22 horas, não foi possível observar diferença entre os grupos quanto aos diferentes estádios de maturação. A ativação da PK-C acelera o reinício da meiose independentemente das células somáticas e acelera a progressão até os estádios de MI e MII na dependência das células do cumulus.

Fator de crescimento derivado das plaquetas, retinol e insulina na regulaçäo da maturaçäo nuclear de oócitos bovinos e suas conseqüências no desenvolvimento embrionário / Platelet-derived growth factor, retinol and insulin in the regulation of bovine oocyte nuclear maturation and their consequent effect in the embryonic development

O objetivo desse trabalho foi verificar as açöes do fator de crescimento derivado das plaquetas (PDGF;P), da insulina (I), do retinol (R) e de suas associaçöes(PI, PIR, IR e PR) na maturaçäo nuclear (MN)de oócitos bovinos e suas consequências no desenvolvimento embrionário (DE). O meio básico para maturaçäo dos oócitos nos diferentes tratamentos foi o TCM-199 modificado acrescido de PVA (controle). No DE, foram utilizados os grupos R, PIR, IR, um controle negativo (PVA) e um controle positivo, contendo soro fetal bovino e gonadotrofinas (SFBHOR). Os fatores P, I, R e suas associaçöes näo aceleraram a MN em 7h mas sim após 18h (P<0,001), com exceçäo dos tratamentos R e PR, nos quais as percentagens de metáfase II foram, respectivamente, de 4,7(porcento) e 8,3(porcento), similares à obtida no grupo-controle (0,0(porcento)). Considerando um nível de significância de P<0,0001 em comparaçäo ao grupo-controle, os maiores índices de matáfase II foram obtidos na presença das associaçöes IR (19,0(porcento)) e PIR (21,3(porcento)). No DE, R (18,3(porcento)), PIR (13,9(porcento)) e IR (10,6(porcento)) incrementaram os índices de clivagem, comparados ao PVA (0,0(porcento);P<0,001), porém näo atingiram os índices do grupo SFBHOR (53,8(porcento);P<0,001). Conclui-se que insulina e PDGF aceleram a MN e suas açöes säo potencializadas pelo retinol. Os índices de clivagem de oócitos maturados na presença de R, IR e PIR säo superiores aos do PVA, mas significativamente inferiores aos maturados em SFBHOR

O acido pipemidico no tratamento da infeccao urinaria. / Pipemidic acid in the urinary tract infection treatment

Vinte e quatro pacientes de sexo feminino, acometidas por infeccoes do trato urinario que procuraram o Pronto-Socorro de Ginecologia do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da Universidade de Sao Paulo, foram tratadas com acido pipemidico, 400 mg 2 vezes ao dia por via oral, por um periodo de sete dias. Do estudo foram excluidas pacientes com molestia imflamatoria pelvica, vulvovaginites ou gestantes.Exame de urina tipo I, cultura e teste de sensibilidade bacteriana foram realizados antes e 10 dias apos o tratamento. O agente mais frequente encontrado foi o E. coli seguido por Staphylococcus saprophyticus, alem de Proteus mirabilis e Citrobacter sp O acido pipemidico mostrou-se altamente eficaz, proporcionando cura bacteriologica e desaparecimento ou melhora da sintomatologia em 87,5% dos casos. A tolerabilidade do medicamento foi muito boa, tendo sido observado apenas um caso de desconforto abdominal e um outro de sensacao de plenitude epigastrica com prurido cutaneo generalizado, anbos transitorios e de leve intensidade

Procedimentos de diagnostico e ensaio terapeutico com tinidazol na leucorreia por Gardnerella vaginalis. / Diagnostic procedures and therapeutic assay with tinidazole in leukorrhea by Gardnerella vaginalis

Foram estudadas 71 pacientes portadoras de leucorreia vaginal que apresentavam caracteristicas clinicas compativeis com a presenca de Gardnerella vaginalis. O estudo incluia procedimentos para diagnostico clinico e laboratorial; na terapeutica ulitizou-se o tinidazol administrado em dose unica de 2,0g, sendo tambem tratados os parceiros sexuais destas pacientes com esta mesma dose. Das 71 pacientes incluidas, em 18 (25,3%) foi confirmado o diagnostico da vaginite por Gardnerella atraves de esfregaco e cultura de secrecao vaginal. Do ponto de vista clinico, 72 horas apos administracao do medicamento, 56% das pacientes estavam curadas; no 7o. dia, 72% e ao termino da 2a. semana 100%. Microbiologicamente, ja no 7o. dia, 83% das pacientes apresentavam culturas negativas e na avaliacao do 14o dia, 100% das pacientes analisadas estavam curadas.Com relacao a reacoes adversas foram observados dois casos de nauseas e dois de epigastralgia, todos com desaparecimento espontaneo. O tinidazol mostrou um elevado grau de eficacia e uma boa tolerabilidade no tratamento da vaginite por Gardnerella vaginalis, constituindo-se em fundamentada escolha no tratamento deste tipo de vaginite